TOMA Advanced Biomedical

Aggiornamento Carta dei Servizi

Mirko — Thu, 14 Mar 2013 11:12:43 +0000

Aggiornamento della carta dei servizi

XV Congresso Nazionale SIGU. Sorrento, 21-24 Novembre 2012

Emanuela Anna Roselli — Wed, 30 Jan 2013 06:01:10 +0000

Cellule staminali mesenchimali derivate da villi coriali al primo trimestre sono stabili geneticamente e applicabili in medicina rigenerativa

Emanuela Anna Roselli1, Silvia Lazzati1, Federico Iseppon1, Massimiliano Manganini2, Livia Marcato1, Laura Garavaglia1, Marzia Bruna Gariboldi3, Federico Maggi1, Francesca Romana Grati1 and Giuseppe Simoni1

1: TOMA Advanced Biomedical Assays S.p.A., settore Ricerca e Sviluppo, 21052 Busto Arsizio (VA), Italia

2: Biocell Center S.p.A, Viale Stelvio 125, 21052 Busto Arsizio (VA), Italia

3: Università dell’Insubria, Dipartimento di Biologia Strutturale e Funzionale (DBSF), 21052 Busto Arsizio (VA), Italia

ABSTRACT

Questa ricerca è volta ad evidenziare la presenza di cellule con potenzialità staminale in campioni di villo coriale (VC) del primo trimestre e di verificarne la stabilità genomica per una possibile applicazione in medicina rigenerativa.

Una piccola aliquota di campioni (5 mg), in esubero rispetto la pratica diagnostica, sono stati crio-conservati in condizioni GMP. A seguito di scongelamento e disgregazione enzimatica, sono state allestite colture cellulari allo scopo di isolare ed espandere in vitro cellule staminali mesenchimali (MSC). La natura mesenchimale è stata indagata tramite analisi citofluorimetrica dell’espressione dei marcatori di staminalità mesenchimale e analisi della capacità differenziativa tramite l’utilizzo di terreni di induzione selettivi La stabilità genomica è stata analizzata ai diversi passaggi in coltura attraverso protocolli a diverso grado di risoluzione tra cui l’analisi del cariotipo, della stabilità dei microsatelliti e oligo arrayCGH 135K per verificare l’assenza di sbilanciamenti cromosomici submicroscopici non evidenziabili citogeneticamente.

L’analisi della curva di crescita delle cellule in coltura ha evidenziato un elevato potenziale proliferativo. La caratterizzazione immunofenotipica ha evidenziato l’espressione di marcatori tipici di MSC e assenza di marcatori ematopoietici. L’analisi della capacità differenziativa ha mostrato un potenziale multilineage verso adipociti, osteociti e condrociti. L’analisi del cariotipo delle MSC espanse in vitro ha confermato una frequenza di aberrazioni cromosomiche non significativamente diversa da quella di colture primarie. Dati ottenuti da analisi CGH-array e analisi della stabilità di microsatelliti tramite confronto del DNA di colture a passaggi precoci e tardivi non ha mostrato variazioni nel numero di copie di segmenti di DNA.

I nostri risultati indicano che è possibile isolare ed espandere estensivamente MSC da villi coriali e che la coltivazione in vitro non interferisce con i meccanismi di riparazione del DNA e con la stabilità del genoma. Alla luce di queste evidenze, cellule staminali mesenchimali fetali risultano essere idonee ad una utilizzazione in medicina rigenerativa.

Roselli_SIGU Sorrento 2012

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4th MEETING FIRST- MSC BETWEEN BIG KILLERS AND NANOPARTICLES. PAVIA, 14 MAGGIO 2012

Emanuela Anna Roselli — Wed, 30 Jan 2013 05:55:51 +0000

Chorionic villi as source of genetically stable mesenchymal stromal cells for regenerative medicine

Emanuela Anna Roselli1, Silvia Lazzati1, Federico Iseppon1, Massimiliano Manganini2, Livia Marcato1, Marzia Bruna Gariboldi3, Francesca Romana Grati1, Federico Maggi1 and Giuseppe Simoni1

1: Research & Development, Cytogenetics and Molecular Biology, TOMA Advanced Biomedical Assays S.p.A., 21052 Busto Arsizio (VA), Italy

2: Biocell Center S.p.A, Viale Stelvio 125, 21052 Busto Arsizio (VA), Italy

3: Dipartimento di Biologia Strutturale e Funzionale (DBSF),University of Insubria, 21052 Busto Arsizio (VA), Italy

ABSTRACT

Objectives

This study was designed to explore the potential of human fetal mesenchymal stromal cells derived from chorionic villi (CV-MSC), in view of a possible applications for cellular therapy and regenerative medicine.

Methods

Small amount (5mg) of direct CV samples were GMP-cryopreserved. Following thawing and enzymatic disgregation, cells were in vitro cultured and analyzed for biological endpoints like proliferation rate, immunophenotype and differentiation potential. Genome stability, by karyotype analysis, genome-wide array-CGH and microsatellite analysis, were also explored.

Results

Immunophenotyping of cultured cells showed expression of typical MSC markers and absence of expression of hematopoietic markers. Analysis of multilineage potential showed efficient differentiation into adipocytes, osteocytes and chondrocytes. Potential differentiation toward neural precursors was demonstrated on a subpopulation of CV-MSC by morphologic features and immunocytochemical staining of neuron specific proteins. Karyotype analysis showed that the frequency of chromosomes aberrations at the different culture passages is not significantly different from the basal frequency found in primary culture. Data obtained from array CGH analysis and microsatellite analysis comparing DNA from early to late passages did not show any copy number variations of DNA segments.

Conclusion

Our findings indicate that it is possible to isolate and extensively expand MSC from cryopreserved direct CV and that the in vitro culture does not interfere with the DNA-repair systems and do not affect genome stability. Under these circumstances, CV-MSC could be suitable for therapeutic proposes.

Roselli_FIRST Pavia 2012

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KaryoLite BoBs: un nuovo metodo con elevata resa diagnostica per indagare i tessuti abortivi

fgrati — Wed, 23 Jan 2013 13:34:44 +0000

Prenat Diagn. 2013 Jan;33(1):32-41. doi: 10.1002/pd.4004. Epub 2012 Nov 2.

Application of a new molecular technique for the genetic evaluation of products of conception.

Grati FR, Gomes DM, Ganesamoorthy D, Marcato L, De Toffol S, Blondeel E, Malvestiti F, Loeuillet L, Ruggeri AM, Wainer R, Maggi F, Aboura A, Dupont C, Tabet AC, Guimiot F, Slater HR, Simoni G, Vialard F.

Source

Research and Development, Cytogenetics and Molecular Biology, TOMA Advanced Biomedical Assays, Busto Arsizio, Varese, Italy.

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Abstract

OBJECTIVES:

Karyotyping is a well-established method of investigating the genetic content of product of conceptions (POCs). Because of the high rate of culture failure and maternal cell contamination, failed results or 46,XX findings are often obtained. Different molecular approaches that are not culture dependent have been proposed to circumvent these limits. On the basis of the robust experience previously obtained with bacterial artificial chromosomes (BACs)-on-Beads™ (BoBs™), we evaluated the same technology that we had used for the analysis of prenatal samples on POCs.

METHOD:

KaryoLite™ BoBs™ includes 91 beads, each of which is conjugated with a composite of multiple neighboring BACs according to the hg19 assembly. It quantifies proximal and terminal regions of each chromosome arm. The study included 376 samples.

RESULTS:

The failure rate was 2%, and reproducibility >99%; false-positive and false-negative rates were <1% for non-mosaic aneuploidies and imbalances effecting all three BACs in a contig. Detection rate for partial terminal imbalances was 65.5%. The mosaic detection threshold was 50%, and the success rate in macerated samples was 87.8%. The aneuploidy detection rate in samples with cell growth failure was 27.8%, and maternal cell contamination was suspected in 23.1% of 46,XX cultured cells.

CONCLUSION:

Citogenetica Molecolare – Array CGH

fgrati — Thu, 10 Jan 2013 06:31:14 +0000

Pubblicazione del position paper del gruppo di lavoro di citogenetica SIGU (Società Italiana di Genetica Umana) sull’applicazione dei microarray (array CGH e SNP array) in diagnosi prenatale

fgrati — Wed, 09 Jan 2013 07:14:54 +0000

Pubblicazione del position paper del gruppo di lavoro di citogenetica SIGU (Società Italiana di Genetica Umana) sull’applicazione dei microarray (array CGH e SNP array) in diagnosi prenatale

Il 20 gennaio 2012 è apparso sulla rivista Ultrasound in Obstetrics and Gynecology il position paper del gruppo di lavoro di citogenetica SIGU sull’applicazione dei microarray (array CGH e SNP array) in diagnosi prenatale. Questo documento è il frutto del lavoro del gruppo di Citogenetica SIGU coordinato dal Dr. Antonio Novelli, che dal 7 aprile 2011 dibatte ed elabora questo argomento. Esso nasce dall’esigenza di fare luce, basandosi alle attuali conoscenze scientifiche nazionali ed internazionali, circa gli ambiti applicativi nella diagnostica prenatale di queste tecnologie che hanno messo in moto una ri(e)voluzione della genetica medica. Al GdL di citogenetica SIGU afferiscono membri appartenenti ad istituzioni pubbliche (ospedali e università) e private, clinici e citogenetisti, esperti di diagnosi prenatale e di microarray costituendo, quindi, una rappresentanza vasta e significativa della genetica medica italiana e internazionale. Il manoscritto è il primo position paper di una società di genetica pubblicato su una rivista scientifica internazionale.

Link all’articolo in PubMed: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22262341

Ultrasound Obstet Gynecol. 2012 Jan 20. doi: 10.1002/uog.11092. [Epub ahead of print]

Microarray application in prenatal diagnosis: a position statement from the cytogenetics working group of the Italian Society of Human Genetics (SIGU), November 2011.

Novelli A, Grati FR, Ballarati L, Bernardini L, Bizzoco D, Camurri L, Casalone R, Cardarelli L, Cavalli P, Ciccone R, Clementi M, Dalprà L, Gentile M, Gelli G, Grammatico P, Malacarne M, Nardone AM, Pecile V, Simoni G, Zuffardi O, Giardino D.

ABSTRACT

Objectives:

At present, a precise guideline establishing chromosome microarray analysis (CMA) applications and platforms in the prenatal setting does not exist. The actual controversial question is whether CMA technologies can or should shortly replace the standard karyotype in prenatal diagnosis practice.

Methods:

Based on review of the recent literature and actual knowledge and experiences of all participants, the SIGU Committee proposes recommendations for the use of CMA in prenatal testing.

Results:

Dataset collections reported in the medical literature clearly show a significant incidence of pathogenic CNVs at 6.4% in the group of pregnancies with ultrasound fetal abnormalities and normal karyotype and the detected CNVs are more likely to have a relevant role in terms of nosology for the fetus and for the assessment of reproductive risks for the couples. The estimation of the frequencies of variations of unclear significance (VOUS) varies depending on the different CMA platforms used spanning from targeted arrays, for which a 0-4% frequency of VOUS has been reported, to high resolution whole genome SNP arrays for which the estimated incidence of VOUS was of 9-12%.

Conclusions:

Presently CMA analysis can be considered a second-tier diagnostic test to be used after a standard karyotype in selected group of pregnancies, such as those with single (apparently isolated) or multiple US fetal abnormalities, with de novo chromosomal rearrangements, even if apparently balanced, and those with supernumerary marker chromosomes.

PMID:22262341 [PubMed - as supplied by publisher]

Giornate Medico-Scientifiche GynePro 2013

fgrati — Mon, 10 Dec 2012 06:11:06 +0000

Le giornate mediche scientifiche GynePro 2013

Verona 22 Febbrario 2013

AGGIORNAMENTI IN TEMA

DI PROCREAZIONE MEDICALMENTE ASSISTITA E DIAGNOSI PRENATALE

OGGETTO DEL CONVEGNO

La Procreazione Medicalmente Assistita e la Diagnosi Prenatale rappresentano strumenti ormai essenziali nell’armamentario diagnostico e terapeutico dello Specialista in Ginecologia ed Ostetricia. Questo Convegno vuole essere un’opportunità di approfondimento e scambio culturale in questi settori in rapida evoluzione scientifica ed assistenziale.

ARGOMENTI\INTERVENTI